Klonieren von Listeriolysin und Internalin als Antigene zum serologischen Nachweis von Listerien

• Forschungsstelle: BLV
• Projektnummer: 012.96.07

Schlüsselwörter (Französisch)

Listeria monocytogenes, Listeriolysine, Internaline, Sérologie

Kurzbeschreibung (Französisch)

Les tests sérologiques actuellement utilisés pour la sérologie de la listériose utilisent des antigènes bactériens complexes. Leur spécificité et leur sensibilité sont peu satisfaisantes. Des travaux récents en médecine humaine et vétérinaire ont montré que des antigènes purifiés tels que la listériolysine (hémolysine de L. monocytogenes) pourraient être utilisés pour développer des tests sérologiques nettement améliorés pour le diagnostique de la listériose et l'étude de son épidémiologie. Le but du présent travail était de cloner la listériolysine et l'internaline A (facteur de virulence de L. monocytogenes nécessaire à son entrée dans les cellules de l'hôte) dans un vecteur d'expression permettant une purification rapide et efficace de ces antigènes.

Projektziele (Französisch)

Le but du présent travail était de cloner la listériolysine et l'internaline A (facteur de virulence de L. monocytogenes nécessaire à son entrée dans les cellules de l'hôte) dans un vecteur d'expression permettant une purification rapide et efficace de ces antigènes.

Abstract (Französisch)

Trois antigènes différents ont été produits: la listériolysine, une forme tronquée de cette dernière (absence de la majeure partie de la protéine responsable de réactions croisées avec des anticorps dirigés contre la streptolysine O de Streptococcus pneumoniae) et l'internaline A. Un peptide d'hexahisitidine a été ajouté par clonage à l'extrémité de chacun de ces antigènes, permettant ainsi leur purification simple par chromatographie afine en conditions dénaturantes. Les trois antigènes obtenus ont étés testés par immunoblot avec quelques séras de bovins atteints de listériose ou provenant d'exploitation où des cas de listériose avaient eu lieu. Sur trois séras de vaches ayant subi des avortements à L. monocytogenes, deux séras contenaient des anticorps contre la listériolysine et l'internaline. Parmi quatre séras issus de bovins nourris avec du silo et provenant d'une exploitation où un cas de listériose avait été enregistré, trois séras étaient clairement positifs pour la présence d'anticorps contre ces deux mêmes antigènes. Parmi cinq séras de bovins sains vendus pour l'exportation, seuls deux séras présentaient des réactions très faible avec l'internaline et la listériolysine et un sérum présentait une réaction forte contre la listériolysine. Les résultats obtenus avec la listériolysine tronquée montrent que la sensibilité d'un test sérologique basé sur cet antigène est nettement plus faible qu'avec la listériolysine complète.
Résultats et conclusions
Des résultats encourageants ont été obtenus avec les antigènes produits dans le cadre de ce projet avec un nombre restreint de séras bovins. Ces résultats demandent cependant à être confirmés sur un nombre plus important de séras. Les résultats du présent travail suggèrent que des bovins ne présentant pas de symptômes cliniques de listériose, mais provenant de fermes où des cas de listériose ont eu lieu et nourris avec du silo peuvent également présenter des anticorps contre la listériolysine et l'internaline. Un phénomènes semblable a été décrit chez les petits ruminants. Il s'agit vraisemblablement de cas d'infection subcliniques passées.

Publikationen / Ergebnisse (Deutsch)

Daten nicht vorhanden.

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