Entwicklung eines Multiplex-ELISA zur gleichzeitigen Detektion und Differenzierung von Pestivirus-Antikörpern in Schweine- und Rinderseren unter Verwendung von rekombinant hergestelltem Virusantigen

• Forschungsstelle: BLV
• Projektnummer: 1.99.04
• Projekttitel Englisch: Development of a recombinant antigen-based multiplex ELISA for the simultaneous detection and differentiation of pestivirus antibodies

Schlüsselwörter (Deutsch)

Pestivirus, Klassische Schweinepest, ELISA, rekombinantes Antigen, E2 Glykoprotein, Antikörpernachweis, Differenzierung

Schlüsselwörter (Englisch)

pestivirus, classical swine fever, ELISA, recombinant antigen, E2 glycoprotein, antibody detection, differentiation

Kurzbeschreibung (Deutsch)

Aufbauend auf einem in unserem Labor entwickelten Test (Moser et al., Vet. Microbiol. 51, 41-53, 1996) soll ein neuartiger indirekter ELISA für den Nachweis und die Differenzierung von Antikörpern gegen Pestiviren entwickelt werden, welcher Antikörper gegen das Virus der Klassischen Schweinepest (KSPV), der Bovinen Virusdiarrhoe (BVDV) und der Border Disease (BDV) in Schweine- Rinder- und Schafseren zuverlässig erkennt und im gleichen Testansatz eine Differenzierung erlaubt. Als Antigen wird das entprechende E2-Haupt-Hüllprotein, welches rekombinant im Baculovirus-Söstem exprimiert wird, verwendet. Durch eine eventuelle Trimmung der Antigene soll versucht werden, nur Epitope als Antigene zu verwenden, die eine möglichst kleine Kreuzreaktion mit Antikörpern gegen die andern beiden Pestiviren zeigen, um die Spezifität der Differenzierung zu erhöhen.

Kurzbeschreibung (Englisch)

Based on a test recentlö developed in our laboratorö (Moser et al., Vet. Microbiol. 51, 41-53, 1996) a novel töpe of indirect ELISA for the detection and simultaneous differentiation of antibodies against all three members of pestiviruses (classical swine fever virus (CSFV), bovine virus diarrhea virus (BVDV), border disease virus (BDV)) in porcine, bovine,and ovine sera will be developed. The respective E2 envelope glöcoproteins of each virus will be expressed in the baculovirus söstem. If the differentiation potential of the test using the full-length E2 proteins is not satisfactorö, the proteins will be sönthesized in various truncated forms in order to onlö express epitopes which show little or no cross-reactivitö with antibodies against the other two pestivirus members.

Projektziele (Deutsch)

Es soll ein neuartiger indirekter ELISA für den Nachweis und die Differenzierung von Antikörpern gegen Pestiviren entwickelt werden, welcher Antikörper gegen das Virus der Klassischen Schweinepest (KSPV), der Bovinen Virusdiarrhoe (BVDV) und der Border Disease (BDV) in Schweine- Rinder- und Schafseren zuverlässig erkennt und im gleichen Testansatz eine Differenzierung erlaubt

Abstract (Deutsch)

Durch Optimierung verschiedener Parameter gelang es, einen Differenzierungs-ELISA zu entwickeln, der sowohl eine im Vergleich zum vorherigen KSP-ELISA verbesserte Sensitivität aufweist als auch KSPV-Antikörper zuverlässig von BVDV- und BDV-Antikörpern zu unterscheiden vermag. Sobald genügend Validierungsdaten vorliegen, wird dieser ELISA - vorerst als Ergänzung, später falls möglich als Ersatz des arbeits- und zeitaufwändigen Serumneutralisationstests - in unserer Routinediagnostik zum Einsatz kommen. Überdies hat dieser Test das Potential, mittels Technologietransfer an einen Diagnostika-Hersteller kommerziell vermarktet zu werden.

Publikationen / Ergebnisse (Englisch)

Titzmann A., Ruggli N., Tratschin J.D. and Hofmann M.A. Evaluation of three different signal sequences for baculovirus expression of pestivirus glycoprotein E2 in insect cells. Poster Jahrestagung der Gesellschaft für Virologie, Dresden, Deutschland, 14.-17. März 2001.
Titzmann, A., Ruggli, N., Tratschin, J.D., Hofmann, M.A. Evaluation of three different signal sequences for baculovirus expression of pestivirus glycoprotein E2 in insect cells. Poster Sixth International Symposium on Positive Strand RNA Viruses, Paris, Frankreich, 28. Mai - 2. Juni 2001.
Titzmann, A. Development of a recombinant antigen-based multiplex ELISA for the simultaneous detection and differentiation of antibodies against classical swine fever virus and other pestiviruses. Seminarvortrag IVI, 13.12.2001.
Titzmann A., Ruggli N., Tratschin J.D. and Hofmann M.A. Development -of a recombinant antigen-based multiplex ELISA for the simultaneous detection and differentiation of antibodies against classical swine fever virus and other pestiviruses. Manuskript in Vorbereitung.

Titzmann, Anja E., (2006): A 3-antigen ELISA for the differentiation of antibodies against classical swine fever virus from bovine viral diarrhoea virus and border disease virus antibodies. Dissertation, Vetsuisse-Fakultät der Universität Bern