Schlüsselwörter
(Deutsch)
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Real-time PCR, BHV-1, PRV
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Schlüsselwörter
(Englisch)
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Real-time PCR, BHV-1, PRV
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Kurzbeschreibung
(Deutsch)
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Dank eines erfolgreichen Bekämpfungsprogrammes ist die Schweiz seit einigen Jahren frei von IBR/IPV. Aufgrund der weiten Verbreitung des Bovinen Herpesvirus 1 (BHV-1, Erreger von IBR/IPV) im Ausland, kommt es immer wieder vor, dass der Erreger erneut in die Schweiz eingeschleppt wird. Problematisch sind insbesondere importierte Samen für die KB, die von wertvollen Vererbern gewonnen werden, welche im Ausland oft auf Stationen stehen, in denen IBR/IPV vorkommt. Solche Stiere sind oft gegen BHV-1 geimpft, so dass die konventionelle Erkennung von möglichen Virusausscheidern auf serologischem Weg schwierig ist. Wir wollen aus diesen Gründen Diagnostikmethoden etablieren, um BHV-1-Kontaminationen in importierten Stierensamen zu erkennen und somit BHV-1-Ausscheider von lediglich aufgrund einer Impfung sero-positiven Tieren zu unterscheiden.
Die Schweiz ist ebenfalls frei von der Aujeszky'schen Krankheit der Schweine. Dessen Agens ist ebenfalls ein Herpesvirus (Pseudorabiesvirus, PRV). Eine Einschleppungs- und Verbreitungsgefahr besteht insbesondere durch das Verfüttern von ungenügend erhitzten Küchenabfällen, die von importierten, verseuchten Tieren oder Tierprodukten stammen. Es soll deshalb eine Methode für den Nachweis von PRV in Schlachtschweinen und deren Produkten etabliert werden.
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Kurzbeschreibung
(Englisch)
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As one of very few countries world-wide, Switzerland has successfully eradicated IBR/IPV and its causative agent Bovine herpesvirus 1 (BHV-1). However, due to the high prevalence of BHV-1 infections in both the European and the Northern American continents, there is a constant risk of reintroduction. Specifically, importation of semen, obtained from valuable bulls, which may be held on not essentially BHV-1-free premises, is considered risky. Such bulls may be vaccinated against BHV-1. However, serological discrimination between vaccinated and infected animals is difficult. For these reasons, it is planned to establish novel diagnostic methods for detection of BHV-1 in imported bull semen.
Switzerland is also free from pseudorabies virus (PRV, Aujesky's Disease) infection of pigs. PRV also belongs to the herpesvirus family. The risk of introduction of this virus is associated with feeding pigs with slaughterhouse or kitchen offal, which have not been properly decontaminated. Therefore, it is proposed to establish diagnostic methods for the detection of PRV DNA in pork and pork-products.
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Projektziele
(Deutsch)
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1. Etablierung einer "Real-time PCR" zum Nachweis von IBR/IPV Virus im Stierensamen.
2. Etablierung einer "Real-time PCR" zum Nachweis von PRV in Schweinen und deren Schlachtprodukten.
3. Akkreditierung der genannten Untersuchungsmethoden.
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Abstract
(Deutsch)
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Der Amplifikationsansatz für BHV-1 amplifizierte neben der BHV-1 DNA auch BHV-5 DNA, nicht aber DNA von equinen oder porzinen Herpesviren. 10 DNA-Moleküle pro Ansatz wurden immer entdeckt. Die lineare Regression zwischen Anzahl DNA-Molekülen und Ct-Wert (Ct = threshold cycle) blieb über 10 logarithmische Verdünnungsstufen erhalten. Im Vergleich zur Virusisolation in Zellkulturen reichte eine Menge von 1.58 TCID50 in 100% der Fälle für ein positives Resultat im Taqman-Ansatz, während bei der Virusisolation mindestens 160 TCID50 für eine 100%ige Detektion notwendig waren.
Beim quantitativen BHV-1 DNA-Nachweis in Nasentupferproben von infizierten Rindern zeigte sich die Überlegenheit der neuen Technik deutlich: Niedrigtitrige Proben sowie Proben aus der Spätphase der Infektion wurden, im Gegensatz zur Isolationsmethode, problemlos quantitativ erfasst. Weil der Geldgeber die entsprechenden Experimente nicht finanzieren konnte, wurden nur wenige Samenproben untersucht. Die Ergebnisse, die zwar auch hier vielversprechend aussahen, sind deshalb nur mit Einschränkungen gültig. Eine Investition des BVet in dieser Richtung wäre mit Sicherheit gut angelegt.
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Publikationen / Ergebnisse
(Englisch)
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Abril et al. (2001): Establishment of real-time fluorogenic PCR for the detection of BHV-1, BHV-5 and PRV in biological samples. Abstract SGM in Lausanne (+Poster).
Abril et al. (2001): Comparison of BHV-1 excretion in calves with or without maternal antibodies by virus isolation and Taqman PCR. Abstract Herpesvirus Workshop Regensburg (+Poster).
Abril et al. (2002): Pathogenesis of bovine herpesvirus type 1 (BHV-1) and bovine herpesvirus type 5 (BHV-5) in immune-compromised mice. Abstract SGM Luzern. (+Poster).
Hüssy, D., Janett, F., Albini, S., Stäuber, N., Thun, R., Ackermann, M. (2002): Analysis of the Pathogenetic Basis for Shedding and Transmission of Ovine Gamma Herpesvirus 2. Journal of Clinical Microbiology, Vol. 40, No. 12, p 4700-4704
Abril, C. et al. (2004): Both Viral and Host Factors Contriute to Neurovirulence of Bovine Herpesviruses 1 and 5 in Interferon Receptor-Deficient Mice. Journal of Virology, Vol. 78, No. 7, p.3644-3653
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